生物化学蛋白质的沉淀反应实验报告
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生化实验中,乙醇沉淀蛋白质会加入乙酸会,重金属盐沉淀蛋白质试验中...
下面介绍几种能使蛋白质因变性而沉淀的方法:重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质可以与重金属离子如汞、铅、铜、银等结合成盐沉淀,沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜。因为此时蛋白质分子有较多的负离子易与重金属离子结合成盐。
以上方法分离制备得到的蛋白质一般仍保持天然蛋白质的生物活性,将其重新溶解于水仍然能成为稳定的胶体溶液。但用有机溶剂来沉淀分离蛋白质时,需在低温下进行,在较高温度下进行会破坏蛋白质的天然构象。
破坏蛋白质的水化膜,蛋白质在水中的溶解度下降;当然也不排除使蛋白质变性(酒精消毒的原理)。
临床上可将蛋白质与重金属盐结合,抢救误服重金属盐中毒的患者,再将结合的重金属盐与催吐剂一起呕吐解毒。重金属盐沉淀蛋白质蛋白质可以与汞、铅、铜、银等重金属离子结合。形成盐沉淀。沉淀条件是pH略高于等电点。
第一个是盐析现象,原因是水溶性蛋白质的表面电荷被中和,从而分子聚集沉淀。第二个是相似相容原理,水溶性蛋白当然不会溶于有机溶剂(如果溶剂比如酒精让蛋白质变性,那就是另外一回事了。
重金属离子沉淀蛋白质的结果
不能,因为重金属离子会使蛋白质变性,这个变性是不可逆的。与之相似的是在蛋白质溶液中加盐,会发生盐析,使蛋白质溶解度降低而析出的过程,这个过程是可逆的,加水后会溶解一部分。
重金属沉淀,加硝酸银,生成沉淀,静置,去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。原因:重金属离子使蛋白质变性,是不可逆沉淀,所以加水后无法溶解。加有机酸,加三氯乙酸,生成沉淀,倾去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。
重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时,蛋白质为阳离子,能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀。
重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质可以与重金属离子如汞、铅、铜、银等结合成盐沉淀。重金属沉淀的蛋白质常是变性的,但若在低温条件下,并控制重金属离子浓度,也可用于分离制备不变性的蛋白质。
首先培养基中有钙离子和磷酸根离子会生成微溶于水的磷酸钙沉淀,不会影响培养结果的。对于铅离子使LB沉淀,是重金属铅离子使溶液中的蛋白质变性析出了。最后只能LB和铅离子分别灭菌,冷却后在混合。
变性原因 变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果。
蛋白质的沉淀反应实验应注意哪些问题
1、蛋白质的沉淀反应如下:盐析是一种将溶液中的蛋白质分离出来的物理方法。它基于蛋白质在高盐浓度条件下与离子相互作用形成沉淀,从而实现蛋白质的分离和提纯。
2、生物碱试剂沉淀蛋白质实验现象如下:“现象是蛋白质溶液内加入生物碱试剂,产生絮状沉淀(大概植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物成为生物碱。 能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂。
3、好了 1号管有乙醇,还有缓冲液(缓冲液就是由酸碱组成的),1号管沉淀了,你要说明这是因为乙醇而不是缓冲液啊。
4、随着时间的延长,这些沉淀物会更加牢固地黏附于镜片表面并发生变性。变性的蛋白质会导致镜片的舒适度、视力和总体满意度下降,还会引起某些过敏反应,如接触镜相关乳头状结膜炎(CLPC)和巨乳头性结膜炎(CPC)。
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